尺寸排阻色谱柱是一种基于分子尺寸差异进行分离的高效色谱柱。基于多孔性凝胶作为固定相，利用分子在凝胶孔道中的排阻效应进行分离。在色谱柱中，大分子不能渗透到凝胶孔穴中去而被排阻，较早地流出色谱柱；中等体积的分子部分渗透；小分子则能够完辩渗透入凝胶孔道内，最后流出色谱柱。因此，样品分子基本按其分子大小先后流出，从而达到分离的目的。
尺寸排阻色谱柱的使用技巧：
1、色谱柱的选择与准备
选择正确的色谱柱：根据待测样品的性质和分子量范围选择合适的色谱柱。例如，对于分子量较大的样品，应选择具有较大排阻极限的柱子。
色谱柱的储存与维护：在不使用时应将色谱柱存放在适当的有机溶剂中，如甲醇或乙醇，以防止微生物生长和色谱柱干裂。
2、样品的准备
样品溶解性：确保样品完辩溶解在流动相中，避免样品在柱上沉淀或聚集。
过滤与脱气：样品溶液应通过0.22微米或更小的滤膜过滤，并彻诲脱气，以防止气泡影响色谱分析。
3、流动相的选择与优化
流动相组成：选择与样品化学性质兼容的流动相，常用的流动相包括水、盐溶液或有机溶剂等。
流动相流速：调整适宜的流速，通常流速的增加可以缩短分析时间，但过高的流速可能引起柱效降低。
4、系统的温度控制
恒定温度：保持色谱系统在恒定的温度下运行，温度波动可能会影响色谱峰的形状和分离度。
5、检测器的正确设置
选择合适的检测器：常用的检测器有折射率检测器和紫外吸收检测器。选择时应考虑样品的化学性质和检测灵敏度需求。
检测器灵敏度：适当调节检测器的灵敏度，以获得清晰可辨的色谱峰而不至于过载。
6、数据分析与处理
校准曲线的建立：使用一组已知分子量的标样来建立校准曲线，这对于准确测定未知样品的分子量至关重要。
数据处理软件：利用专业的数据处理软件进行数据收集和分析，可以有效提高数据处理的准确性和效率。
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