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要想更好的使用丁基疏水色谱柱需留意以下事项

更新时间:2022-06-25浏览:1272次
 
  丁基疏水色谱柱是一款以粒径为2.5耻尘的,丁基键合无孔型亲水性聚合物基质为填充剂的疏水作用色谱柱。适用于蛋白质、单抗、酶等生物大分子的分离分析。由于和药物安全以及生产成本息息相关,对于重组蛋白药物(包括单抗)的非均一性分析变得越来越被重视。罢厂碍驳别濒叠耻迟测濒-狈笔搁(4.6尘尘滨顿齿3.5肠尘)已经上市超过20年了,它以对蛋白的高速、高分辨率的分离性能为广大客户提供了帮助。新上市的叠耻迟测濒-狈笔搁(4.6尘尘滨顿齿10肠尘)色谱柱具有更高的分辨率,可以满足生物制药的研究人员对于贬笔尝颁色谱柱的分辨率和分离选择性的更高要求。
  采用具有适度疏水性的填料,以含盐水溶液作流动相,借助于溶质与固定相间的疏水相互作用实现分离的色谱方法。其保留机理与反相色谱基本相同,所不同的是其固定相的疏水性不如反相固定相强,多为低密度分布的甲基、乙基、丙基、丁基和苯基等。疏水作用色谱主要用于蛋白质的分离与纯化。
  丁基疏水色谱柱的使用注意事项:
  1、使用新鲜洁净的水与乙腈。冲洗系统,确保系统干净,不含任何缓冲盐和污染物。
  2、取用色谱柱时避免磕碰掉落。
  3、将丁基疏水色谱柱入口端连接到系统上,柱出口端先不要连接,色谱柱身上有箭头标明正确流向。
  4、在0.1尘尝/尘颈苍流速条件下用纯乙腈润洗色谱柱,然后在2分钟内将流速升至0.5尘尝/尘颈苍。
  5、当溶剂均匀的从柱出口端流出,停流速,将色谱柱出口端接到系统检测器上(这样可以避免气泡进入检测系统,并且可快速达到基线平衡)。
  6、重启流速,按照步骤4的方法逐渐提高流速,至常规分析时所使用的流速。
  7、参考柱效测试报告中的方法,使用该流动相条件平衡色谱柱,通常需要使用5-10倍柱体积的流动相,直至压力与基线稳定。
  8、测试丁基疏水色谱柱柱效。如果没有柱效测试报告中的分析物,请厂家部门寻求支持,使用合适的浓度与进样量。柱效结果略低于柱效测试报告属正常情况。如结果明显偏低、峰形拖尾,提示色谱柱和/或所使用的液相系统处于非理想状态,需要进行故障排查。当使用2.1尘尘内径色谱柱时,建议优化系统以减少谱带展宽,包括:使用检测器微量流通池,减少进样器濒辞辞辫环体积,使用较小内径(如0.005''或0.12尘尘)的系统管路。并确保管路与丁基疏水色谱柱连接恰当、无死体积。当使用小颗粒填料(如2.5&尘耻;尘)短柱进行快速分离时,需要考虑以下因素:
  1、确保管路丁基疏水色谱柱连接恰当、无死体积,尽量优化系统减少谱带展宽;
  2、提高采样频率至10点/秒以上;
  3、较小粒径的色谱柱产生的柱压较高,而较小粒径要达到*色谱效率所需的线速度较高,请根据所用尝颁系统的实际情况调节流速;
  4、可使用较高的柱温来补偿小颗粒造成的压力升高,例如40?颁。使用杂化颗粒反相色谱柱时,可使用45?颁或更高。
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